数字实时 PCR QuantStudio 3D
QuantStudio 3D 数字实时 PCR 系统
经济实惠、紧凑易用的数字 PCR 系统。
概述
Applied Biosystems QuantStudio 3D 数字 PCR 系统是一个简单、经济实惠的平台,采用密封芯片技术,为进行数字 PCR 提供了高效、可靠和稳定的方法。基于一站式芯片的工作流程让您可以加载芯片、密封并继续扩增。
QuantStudio 3D 系统扩展了传统实时 PCR 的界限,可以绝对定量,无需使用标准曲线。
特点
QuantStudio 3D 数字系统提供:
每个芯片20,000个纳米级反应孔 与基于液滴的方法相比,样品加载控制更佳,未完成的反应更少,从而确保绝对定量的更高精度
一次热循环多达24个芯片 QuantStudio 3D 数字 PCR 系统只需不到30秒即可读取每个芯片,从而利用简单、高效的工作流程来进行数字 PCR。
基于芯片的一站式工作流程 简单的工作流程;只需加载和密封即可进行 PCR 和分析,如下所示:
样品数据
QuantStudio 3D 数字 PCR 系统精度
利用 8个assay的TaqMan 基因表达Assay Panel扩增五个独立的重复。所有检测值均在相应平均值(绿线)的 ±10%(红线)范围内。(A) 低水平基因表达的结果(HPRT1、MYC 和 VEGFA)。(B) 高水平基因表达的结果(18S、B2M、GAPDH、GUSB 和 PPIA)。
QuantStudio 3D 数字 PCR 系统的准确度
经过评估,QuantStudio 3D 数字 PCR 系统绝对定量的准确度与两种正交定量方法一致。使用男性基因组 DNA,利用 QuantStudio 12K Flex OpenArray 数字 PCR 板 (OA) 上的 UV 分光光度计和数字 PCR 测定两种浓度的拷贝数/μL,并在 QuantStudio 3D 数字 PCR 系统 (QS3D) 上测定5个技术重复两种浓度的拷贝数/μL,然后进行对比。两种样品的预期目标浓度为300个拷贝/μL 和1,500个拷贝/μL,均在预期值范围内,而 QuantStudio 3D 数字 PCR 系统得出的检测结果与其他方法相比具有极高的精度。
在9份独立 DNA 样品(相当于0–8个拷贝)中,对17号染色体上的 CCL3L1 基因位点的拷贝数分析所显示的精度和准确度。
(A) 实验设计和所检测样品组的结果数据。每个数字 PCR 检测值均落在预期值的标准差范围内。值得注意的是,所有检测值变异系数 (CV) 均小于2.55%,充分表明可以达到很高的精度。
(B) A 中所显示相同数据的图形表现。由于达到很高的精度,数字 PCR 结果可以区分出含有7个拷贝和8个拷贝的样品。
通过数字 PCR 进行 KRAS 微量等位基因定量的示例在 QuantStudio 3D 数字 PCR 系统上,利用针对数字 PCR 进行了优化的定制 TaqMan SNP 基因分型分析检测 KRAS G12V 突变。
每份样品的结果表示突变质粒在野生型基因组 DNA 中的比例。0.1%目标表示在野生型基因组 DNA 背景中的突变细胞系中的突变基因组 DNA。所有样品均使用配备相对定量模块的 QuantStudio 3D AnalysisSuite Cloud Software 进行分析。(A) 目标检出突变率为10%。突变检出率为10.384%,置信区间为8.235–13.076%。(B) 目标检出突变率为1%。突变检出率为1.393%,置信区间为0.772–2.507%。(C) 目标检出突变率为0.1%。突变检出率为0.142%,置信区间为0.064–0.310%。(D) 野生型对照样品。
性能数据
QuantStudio 3D 数字 PCR 仪器 |
|
读取一份样品的时间 |
约30秒 |
PCR 检测方法 |
终点 |
样品光源 |
LED |
样品检测 |
CMOS |
检测通道 |
FAM/SYBR Green、VIC、ROX |
读取器尺寸(高 x 宽 x 深) |
21 x 13.5 x 23.25 cm(8.3 x 5.3 x 9.15 英寸) |
重量 |
2.4 kg(5.3磅) |
QuantStudio 3D 数字 PCR 20K 芯片 |
|
分区 |
芯片反应孔 |
每个芯片的样品 |
1 |
每个芯片的目标 |
2 |
热循环仪中的芯片容量 |
24 |
每份样品的反应孔 |
20,000 |
加载体积 |
14.5 μL |
密封工作流程 |
是 |
性能 |
|
动态范围 |
5个对数级 |
95%置信区间的精度 |
±10% |
兼容的化学品 |
TaqMan 和 SYBR Green 化学品 |